Accell siRNA Reagents

製品特長

  • トランスフェクション試薬不要
    トランスフェクション試薬やウイルスベクターを使わず効果的にsiRNA を導入
  • さまざまな細胞におけるsiRNA実験
    初代培養細胞、神経細胞、免疫細胞などさまざまな細胞へsiRNAを導入できます
  • 容易な条件設定
    トランスフェクション試薬が不要のため幅広い条件で使えます（通常は細胞密度のみ検討）
  • 低い毒性
    リピッド系トランスフェクション試薬に由来する細胞毒性がありません

製品概要

Accell siRNA は独自の化学修飾により、トランスフェクション試薬を使わずに細胞へ導入できるsiRNA です。細胞への 導入は、Accell siRNA を専用培地（Accell siRNA delivery media）と混ぜて細胞を培養するだけで、従来導入が難しかった細胞でもRNAi 実験を可能としました。トランスフェクション試薬による細胞毒性を回避でき、配列デザインと化学修飾によりオフターゲット効果を最大限抑えているため目的の遺伝子をより特異的にノックダウンします。
また、ON-TARGETplus siRNA Reagent やsiGENOMEsiRNA Reagent と同様に、4 種類のsiRNA を混合したSMARTpool 試薬は、高いノックダウン効果を維持しながら、オフターゲット効果を最小に抑え、ターゲット遺伝子をより確実にノックダウンします。
Accell Control試薬（実験を正確に評価するにはコントロール試薬も必要となります）

1μM Accell siRNA で発現抑制（70%以上抑制）が確認できた細胞
ヒト浮遊細胞 細胞数 (10の3乗 細胞 / well)
Jurkat T-Lymphocyte, Acute Monocytic Leukemia 2.5-5
THP-1 Monocyte, Acute Monocytic Leukemia 2.5-10
IM-9 Peripheral blood lymphoblast 10
ヒト体性幹細胞（Stem Cell） 細胞数 (10の3乗 細胞 / well)
Osteoblasts From hMSC (Mesenchymal Stem Cell) 30
Adipocytes From hMSC (Mesenchymal Stem Cell) 30
ヒト・マウス・ラット初代培養細胞 細胞数 (10の3乗 細胞 / well)
HUVEC Human, umbilical vein, endothelial 2.5-10
HUASMC Human, primary smooth muscle 2.5
hMSC Human, undifferentiated mesenchymal stem cells 2.5
PBMC Human, peripheral blood mononuclear cells 200
T-cells Human, Primary lymphocyte 200
NHA Human, primary astrocytes 1
Hepatocytes Mouse, liver 10
Neurons Rat, primary striatum 75
Neurons Rat, primary cortical 75
その他マウス・ラット細胞株 細胞数 (10の3乗 細胞 / well)
3T3 NIH Mouse, embryo, fibroblast 2.5
ES-D3 Mouse, pluripotent embryonic stem cells 2.5-5
3T3 L1 Mouse, embryo, fibroblast 2.5
C2C12 Mouse, muscle myoblast 10-20
H9C2 Rat, heart, myocardium 2.5
PC12 Rat, pheochromocytoma 5-20
Rat2 Rat, embryo, fibroblast 10
ヒト接着細胞株 細胞数 (10の3乗 細胞 / well)
SH-SY5Y Neuroblastoma 2.5-10
IMR32 Neuroblastoma 10
LAN5 Neuroblastoma 10
HeLa Cervix, adenocarcinoma 2.5-10
HeLa S3 Cervix, adenocarcinoma 2.5-10
LNCap Prostate, metastatic 5-30
MCF10a Epithelial, mammary gland 2.5-10
293T Epithelial, kidney 2.5
MCF-7 Breast cancer 2.5-10
SK-BR3 Breast cancer 2.5
Huh7 Hepatoma 5-10
GTM-3 Glaucomatour trabecular meshwork 2.5
DU145 Prostate, mets, brain carcinoma 2.5
HT1080 Connective tissue, fibrosarcoma 2.5
DLD-1 Epethelial, colon colorectal adenocarcinoma 5-10
HepG2 Liver, hepatocellular carcinoma 2.5
U2OS Bone, osteosarcoma, epithelial 5-20
A-375 Epithelial, skin, malignant melanoma 5-20
U87MG Glioblastoma 2.5-5
HEK293 Kidney, embryonic 2.5-10
MIA Paca-2 Pancreas, carcinoma 5-20
NCI/ADR-RES Multi-drug resistant breast cancer 5-20
OVCAR-3 Ovary, adenocarcinoma 5-20
SKOV3 Ovary, carcinoma 5-20
A549 Epithelial, lung, carcinoma 7

各細胞を表に示した 細胞数、96 wellプレートにまき、1 μM Accell siRNA を含む Accell siRNA Delivery Media (製品コード番号B-005000-100)で細胞培養し、導入しました。ヒト細胞には Accell Cyclophilin B Control siRNA (製品コード番号D-001920-01)、マウス・ラット細胞には Accell GAPDH Control siRNA (製品コード番号D-001930-02 (マウス), D-001930-03 (ラット))を導入しました。

ラット初代培養神経細胞へのAccell siRNAの遺伝子導入

(A)Accell Red non-targeting siRNA　(B) 神経分化マーカーβ tublin

1μM NTC siRNAをラット初代培養神経細胞へ標準プロトコールにしたがって遺伝子導入し、導入72時間後に神経分化マーカーであるβ tublin（細胞骨格タンパク質）に対する蛍光抗体で細胞を免疫染色し、蛍光顕微鏡により観察しました。(A)Accell Red non-targeting siRNA (B) 神経分化マーカーβ tublin

Accell siRNA 実験ワークフロー

Accell siRNA 実験ワークフロー

1. Accell siRNAとAccell siRNA delivery mediaを混合
2. 培地をAccell delivery mixと置き換え72時間培養

低く抑えられたオフターゲット効果

HeLa細胞をそれぞれ、(a) 脂質ベースの遺伝子導入試薬のみ（他社）、(b)1 μM Accell Cyclophilin B Control siRNA、(c)1 μM Accell Non-targeting Control siRNA #1の3条件で培養し、total RNAを抽出して、マイクロアレイ（Agilent Whole Human Genome Array, 22K format）による発現解析を行いました。これまで、リポフェクション法によるトランスフェクションでは、細胞の炎症反応や毒性を示すことが知られていますが、Accell siRNAでは目的とする遺伝子の発現抑制に影響をあたえるような細胞応答は起こりません。

炎症関連タンパク質の発現が誘導されない低毒性

HeLa S3細胞を、リピッド系トランスフェクション試薬（DharmaFECT 1）のみ、1 μM Accell siRNA （#1, 2, 3, 4； diazepam binding inhibotorをターゲット）、Accell siRNA delivery mediaのみでそれぞれ処理しました。72時間後の培養上清についてSearchLight arrayを用い、IL-8および8種類のインターフェロン応答因子（IL-1a, IL-1b, IL-2, IL-6, IL-10, IL-12p70, IFNg, TNFa）の発現を解析しました。

製品注文方法（ユーザー登録）について

　Thermo Scientific Dharmacon RNAi製品のご注文にはユーザー登録が必要です。未登録の方は、ユーザー登録ページを参照の上、ユーザー登録を行なってください。 不明な点は、お気軽に弊社バイオサイエンス事業本部営業部（TEL 03-5826-1655）までお問い合わせください。
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