ON-TARGETplus siRNA Reagents

  • ON-TARGETplus化学修飾によりsiRNAの特異性を高めると同時にオフターゲット効果を低減
  • 最先端のバイオインフォマティクスによりsiRNAの特異性を改善

製品概要

ON-TARGETplus siRNA は siGENOME siRNA のアップグレード版として、オフターゲット効果をより抑え、siRNA のターゲット遺伝子特異性を向上させたsiRNA です。センス鎖とアンチセンス鎖の両鎖に対するON-TARGETplus 修飾と、オフターゲット効果に関する最新のバイオインフォマティクスを導入したsiRNA デザインを用いています。また、Accell siRNA Reagent やsiGENOME siRNA Reagentと同様に、4 種類のsiRNA を混合したSMARTpool 試薬は、高いノックダウン効率を維持しながら、オフターゲット効果を最小に抑え、ターゲット遺伝子をより確実にノックダウンします。

ON-TARGETplus control試薬

siGENOMEおよびON-TARGETplusの機能保証について

siGENOME SMARTpoolおよびON-TARGETplus SMARTpoolでは、mRNAレベルで75%以上の遺伝子発現抑制を機能保証します。また、siGENOME Set of 4およびON-TARGETplus Set of 4 （Upgrade含む）では、4種類のうちの3種類のsiRNAについて、mRNAレベルで75%以上の遺伝子発現抑制を機能保証します。
機能保証は、siRNAが最適な条件で細胞にトランスフェクションされていることがポジティブコントロールsiRNA（遺伝子発現抑制が十分に高いsiRNA）により確認されている同一の実験において、100 nM濃度のsiRNAをトランスフェクションして24時間後および48時間後のmRNAレベルの解析結果が対象となります。
これらの条件を満たした上で、mRNAの発現抑制が75%に満たない場合には、1回に限り交換品を提供いたします。機能保証の適用にあたってはこれらの実験条件、結果等を詳細に確認させていただきますのであらかじめご了承願います。
多くのsiGENOMEおよびON-TARGETplus siRNA製品は5-20 nM濃度で十分に機能します。実験系確立後には、発現抑制がみられる範囲内でsiRNAの濃度を下げ、オフターゲット効果の可能性を低くすることをおすすめします。なお、Accell siRNA製品は1 μMで用います。また上記の機能保証は適用されません。

オフターゲット効果にはsiRNAのPool化（混合）と修飾ケミカルが重要

比較定量解析グラフ

20の遺伝子に対するsiRNAによるオフターゲット効果をマイクロアレイ解析（Agilent社）によって比較定量解析を行いました。データは遺伝子発現量が2倍以上下がった遺伝子の数を示しており、ボック中のラインは中央値を示しています。このようにON-TARGETplus修飾ケミカルを用いて合成したsiRNAをPool化することでオフターゲット効果が最小になることが分かります。

ON-TARGETplus siRNAによるオフターゲット効果の低減

オフターゲット効果 ターゲットなる遺伝子の発現量の変化

5つの遺伝子（LMNA、MEK1、GAPD、PPIB、PPARg）に対して、ON-TARGETplus 修飾したsiRNAと未修飾siRNAをそれぞれトランスフェクションし、これらのsiRNAによるオフターゲット効果とターゲット遺伝子の発現抑制をマイクロアレイ解析（Agilent社）ならびにbranched DNA analysis (Panomics社)により解析しました。上のグラフは2倍以上発現が下がったオフターゲット（ターゲットでない）遺伝子の数をそれぞれのsiRNAに対して示しています。また、下のグラフではそれぞれのターゲットなる遺伝子の発現量の変化を示しています。

アンチセンス鎖のseed 領域がオフターゲット効果に影響します

アンチセンス鎖のseed 領域がオフターゲット効果に影響します。siRNAのアンチセンス鎖のseed領域（ポジション2-7）とオフターゲット遺伝子・発現に影響のなかった遺伝子の5'UTR・ORF・3'UTR間での相補性を調べたところ、オフターゲット遺伝子の3'UTRでseed領域にマッチする遺伝子の数が発現に影響のなかった遺伝子よりも約5倍多いことが分かりました。

製品注文方法（ユーザー登録）について

　Thermo Scientific Dharmacon RNAi製品のご注文にはユーザー登録が必要です。未登録の方は、ユーザー登録ページを参照の上、ユーザー登録を行なってください。 不明な点は、お気軽に弊社バイオサイエンス事業本部営業部（TEL 03-3811-3621）までお問い合わせください。
　既にユーザー登録済みのお客様は、そのままショッピングカートに購入希望の製品を入れてから、ユーザー認証へ進んでください。