Pierce SDS-PAGE Sample Prep Kit
夾雑物によるSDS-PAGEバンドの歪みを解消します
進化した PAGEprep® Advance Protein Clean-up and Enrichment Kit はSDS-PAGE分析が困難であった試料のクリーンアップと濃縮をより効果的に行います。泳動バッファーやSDS-PAGE分離には共存不可な阻害物質が多数存在します。例えば、6Mグアニジン塩酸塩を含むタンパク質試料をLaemmliバッファーに混合すると沈殿が生じます。高濃度の界面活性剤も SDS-PAGEでのバンドの歪みを生じます（図1）。PAGEprep Advance Kit はスピンカップ採用の短時間の精製・濃縮で、カオトロピック試薬・界面活性剤・脂質・pH・塩などの阻害因子を除去します。
図 1. 界面活性剤によるバンド歪みの解消
Rat C6 細胞を可溶化し膜タンパク質フラクションをMem-PER Eukaryotic Membrane Protein Extraction Reagent (#89826).により分画・調製した。PAGEprep処理もしくは未処理の、各細胞フラクション（膜タンパク質フラクションと水溶性フラクション）は4-20% グラジエントゲルによりSDS-PAGEに供して分離した。ウェスタンブロットはCOX4（シトクロームオキシダーゼサブユニット4）抗体と化学発光基質SuperSignal® West Femto Chemiluminescent Substrate (# 34095)により行った。PAGEprep Kitにより処理された試料のバンドは未処理の試料に比べて、良好な直線性と解像度を示した。 S = Soluble fraction (hydrophilic), M = Membrane
特徴
- 染料、還元剤、界面活性剤、糖、グリセロール、グアニジン、ウレア、硫安を除去
- 20分間以内に70ugまでのタンパク質を含む試料(2-350ul)を8倍まで濃縮
- PAGEprep®処理後のBCAアッセイによる定量も可能
- 再現性の高いSDS-PAGE分析
- 新採用スピンカップ方式、迅速で効果的
70ugまでのタンパク質を含む2-350ulの試料を、20ulのPAGEprep® Advanceレジン（modified diatomaceous earth）と混合して使用します。DMSOを添加することでタンパク質はレジンに結合しますが、未結合の夾雑物質はスピンカップから洗浄・除去されます。結合させたタンパク質は50ulの溶出バッファーにより溶出されます。この溶出バッファーの組成はBCAアッセイに対応しているので、必要であれば一部を分取してBCAタンパク質定量も行うことが出来ます。溶出した試料はキットに含まれる5×サンプルバッファーや他のサンプルバッファーと混合して、続くSDS-PAGE分析を行うことが出来ます。スピンカップ方式を採用したPAGEprep® Advance Kitは従来のPAGEprep(バッチ方式)に比べて、より迅速で効果的でロスの少ない、改善された回収率とキャパシティを実現しました。プロセスは20分以内に完了し、70ugまでの殆どのタンパク質で約70-85％の回収率となります。
図 2. PAGEprep Advance Kitによるタンパク質の回収率
様々な分子量 (30K, 44K, 80K, 86K, 12K, バクテリアライセート 27K) の精製タンパク質 (60ug) をPAGEprep Advance Kitにより処理した。 タンパク質の濃度はBCA Protein Assayにより決定し回収率（%）を算出した。
PAGEprep® Advance Kitによるサンプル処理の例
- グアニジン塩酸塩により可溶化されたインクルージョンボディ（封入体）
- 低pHバッファー、チオシアネート、ウレアを含むサンプル
- 硫安沈殿させたタンパク質
- 希薄なタンパク質サンプル
| 阻害物質 | タンパク質の回収率 (開始量 = 20 ug BSA) |
| Control (Water) | 75% |
| 0.5 M Sodium Chloride | 80% |
| 2 M Ammonium Sulfate | 76% |
| 20% SDS | 75% |
| 10% Triton* Detergent | 75% |
| 6 M Urea: DMSO (1:3 ratio) | 75% |
| 1M Sodium Chloride | 75% |
| 6M Urea | 74% |
| 10% CHAPS | 80% |
| 25% Glycerol | 71% |
| 10% OTG | 71% |
| 2 M Guanidinium / HCl | 70% |
| 40% Sucrose | 70% |
| Cat.# | 製品名 | 容 量 | 価格 | |
| 89888 | Pierce SDS-PAGE Sample Prep Kit 50回分の試薬 |
Kit | ¥29,500 | |
| PAGE-prep Resin, DMSO-slurry 高純度DMSO (dimethylsulfoxide) PAGE-prep 溶出バッファー スピンカップ コレクションチューブ レーンマーカー非還元型サンプルバッファー(5X) |
1 ml 27 ml 5 mL 50 72 5 ml |
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| 26800 | PAGEprep Protein Clean-Up Kit #89888が代替え品となります |
Kit | 販売終了 | |
