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Pierce Catalog

Mem-PER Eukaryotic Membrane Protein
Extraction Kit

哺乳動物培養細胞・組織・酵母からの膜タンパク質抽出用キット

　Mem-PER Eukaryotic Membrane Protein Extraction Kit は、界面活性剤を含む試薬で膜タンパク質を抽出・可溶化した後、親水性画分と疎水性画分への二相分離を行い、疎水性画分に膜タンパク質を回収します。

特長

  • 約1 時間の操作で膜タンパク質を抽出分離
  • 抽出したサンプルは二次元電気泳動、ウェスタンブロッティング、 Pierce 660 nm Protein Assay による総タンパク質定量の各アプ リケーションに対応
  • 親水性タンパク質のコンタミネーションを最小限（< 10%）に抑え、膜タンパク質を回収

MEMPER Fig1

MEM-PER Fig.2

図2. 各フラクションマーカータンパク質のウェスタンブロッティングによる検出
NIH 3T3、Hela、C6 の各細胞からMem-PER を用いてタンパク質抽出を行いました。疎水性画分（図中のM）と親水性画分（図中のH）は、それぞれSDS 電気泳動* で分離後、Flotillin、Cox4（シトクロームオキシダーゼサブユニット）、AchE（アセチルコリンエステラーゼ）、hsp90（ヒートショックプロテイン 90）に対する抗体を用いてウェスタンブロッティングで検出しました。
＊ 疎水性画分については、Pierce SDS-PAGE Sample Prep Kit（製品コード89888）を用いて界面活性剤を除去してから電気泳動しました。

表1. Mem-PERによるタンパク質の分離
Cell Type Fraction Flotillin
(2回貫通)		 Cox4
(1回貫通)		 AchE
(peripheral)		 Hsp90
(cytosolic)
NIH3T3 Membrane
Hydrophilic		 45
55		 90.8
9.2		 1.7
98.3		 6.8
93.2
HeLa Membrane
Hydrophilic		 48.4
51.6		 89.1
10.8		 4.1
95.9		 15.5
84.4
C6 Membrane
Hydrophilic		 56
44		 94.5
5.5		 6.4
93.6		 10.6
89.4

M-PER Fig.3

図3. Mem-PERを使用して可溶化した酵母タンパク質の分離
3試料を複製し、S. cerevisiae (EGY-194 株)からの酵母タンパク質を可溶化して疎水相分離により分離した。S. cerevisiae の形質膜、オルガネラ膜に関する数種のタンパク質、水溶性の細胞質タンパク質をMem-PERにより可溶化して抽出した。分離効率は各タンパク質に対するウェスタンブロット分析により決定した。全ての細胞残渣において、僅かなタンパク質が検出された（DATA未公開）。
MP = ミトコンドリアポーリン(ミトコンドリア外膜), PGK = ホスホグリセリン酸キナーゼ, AP = アルカリホスファターゼ, Dpm1p = Dol-O-Man シンターゼ, M = 可溶化された膜タンパク質フラクション, H = 親水性タンパク質フラクション

M-PER Fig.4

図4. ラット肝臓(A)とラット心臓(B)から調製した膜タンパク質抽出物のウェスタンブロット
Mem-PER®により調製された疎水性フラクション(膜タンパク質)と親水性フラクションを VDAC (31 KDa)、Flotillin-1 (48 KDa)、および Cellugryn (29 KDa) についてウェスタンブロット分析に供した。 M = 膜タンパク質フラクション、H = 親水性フラクション

参考文献

  1. Nurnberger, J., et al. (2002). Mol. Biol. Cell. 13, 3096-3106.
  2. Stephano, G.B., et al. (2003). Endocrinology 144(4), 1234-1240.
  3. Wojnar, P., et al. (2003). J. Biol. Chem. 278(18), 16209-16215.
Cat.# 製品名 容 量 価格
89826 Mem-PER Eukaryotic Membrane Protein Extraction
Mem-PER Cell Lysis Reagent 10 ml
Mem-PER Buffer 25 ml
Mem-PER Membrane Protein Solubilization Reagent 40 ml		 Kit ¥37,000