P-PER Plant Protein Extraction Kit 製品問合せ MSDS
 
Pierce Catalog

P-PER Plant Protein Extraction Kit

植物細胞からのタンパク質抽出用キット

P-PER Plant Protein Extraction Kit はさまざまな植物細胞から植物タンパク質を抽出するためのキットです。キットには有機溶媒と2つの水溶性試薬が含まれ、穏やかな機械的破砕により、効率よく植物タンパク質を抽出します。また、抽出物は10分以内に調製でき、総タンパク質定量はそのまま BCA Protein Assay Kit, Reducing Agent Compatible (#23250) により行うこともでき、1-Dおよび2-Dゲル電気泳動、免疫沈降、ウェスタンブロット、活性試験、タンパク精製法などの下流のアプリケーションにも対応しています。

特長

  • フレッシュサンプル・凍結サンプル・脱水サンプルいずれのさまざまな植物組織 (leaf, stem, root, seed, flowers) や 種 (Arabidopsis, tobacco, maize, soybeans, peas, spinach) からタンパク質を抽出可能
  • 液体窒素・凍結破砕、ダウンスホモジナイザー、剪断破砕、ガラスビーズ処理不要
  • 抽出物は BCA Protein Assay Kit, Reducing Agent Compatible によるタンパク質定量が可能
  • 細胞可溶化とタンパク質の抽出は10分間以内に終了

図1. P-PER

図 1. P-PER Plant Protein Extraction Kit プロトコル概要
1. P-PER反応液を調製
2. 組織試料をキット付属のメッシュスクリーンバッグに入れる
3. P-PER反応液を添加
4. 反応液中で試料を乳棒等でマッサージ
5. ライセートを取り出す
6. ライセートを遠心チューブ（PP製またはガラス製）に添加
7. 遠心による分配
8. 下層のタンパク質フラクションを回収

図2. NE-PER

図 2. P-PER Kit と従来法および競合製品とのタンパク抽出における収率の比較
タバコ、トウモロコシ苗木、シロイヌナズナの新鮮な葉を、P-PERプロトコル、競合製品プロトコル、従来法により溶解した。試料は均一化(組織重量/抽出物容量)され、10% Bis-Trisゲルにより分離し、 Imperial Protein Stain (#24615) により染色した。また、BCA Protein Assay Kit, Reducing Agent Compatible (#23250) により総タンパク質を定量した。
Panel A. Lane 1: 分子量スタンダード Lanes 2-4: タバコ葉 Lanes 5-7: トウモロコシ葉 Lanes 8-10: シロイヌナズナ

図3. NE-PER

図3. P-PER 試薬と機械的破砕法との共存性
新鮮なタバコ葉組織からP-PER反応液と一般的な破砕処理によりタンパク質を抽出した。4-12% Bis-Tris ゲルにより電気泳動し、 Imperial Protein Stain (#24615) を用いて染色した。また、試料は BCA Protein Assay Kit, Reducing Agent Compatible (#23250) によりタンパク質を定量した。
Lane 1: 分子量マーカー
Lane 2: メッシュバッグ
Lane 3: Wheatonガラス製ダウンスホモジナイザー
Lane 4: 液体窒素/ペッセルモーターグラインダー
Lane 5: Polytron Tissue Grinder
Lane 6: BioMasher Sample Prep Device (Cartegan社)
Lane 7: blue polypropylene pestle (Kontes社)

図4. NE-PER

図 4. P-PER抽出による総タンパク質の二次元電気泳動
160 mg のシロイヌナズナのロゼットリーフ（放射状に広がった葉）からP-PERによりタンパクを抽出し2次元電気泳動を行った。pH 3-10 nonlinear IPG strips により等電点電気泳動を行い、 8-16% SDS-PAGE により2次元目電気泳動を行った。ゲルは Sypro Ruby により染色。

サポート情報：

  • P-PER 抽出試薬の調製前にプロテアーゼ阻害剤を試薬Aへ添加することをおすすめします。
  • オキシダーゼの阻害やキニンの捕集には、試薬調製前に Sodium metabisulfite を試薬Aへ添加することをおすすめします。
  • フェノール性化合物を豊富に含む組織では、試薬調製前にポリフェノール吸着剤（PEG、PVPP）を試薬Aへ添加することをおすすめします。
  • 抽出後のタンパク質凝集を防ぐために、透析・置換バッファーに安定化剤を添加することをおすすめします。
  • -20℃で保存するには、10-20％のエチレングリコールまたはグリセロールを添加して下さい。
  • 反応試薬は使用直前に調製し、1日以内に使い切って下さい。
  • 脂質、脂肪酸、高分子の糖は上層（有機溶媒層）に分離されます。
Cat.# 製品名 容 量 価格
89803 P-PER Plant Protein Extraction Kit Kit ¥50,000