DyLight蛍光標識抗体/Streptavidin

Pre-diluted horseradish peroxidase conjugates for hassle-free solution prep.

蛍光顕微鏡, フローサイトメトリー, ウエスタンブロット, FLISA, ハイコンテンツ・スクリーニング (HCS)での抗体やタンパク質の標識を目的とした、蛍光強度が高く安定な蛍光色素です。9種類の蛍光色素にはNHSエステルやマレイミドで活性化された誘導体があり、1級アミン(-NH2)またはスルフヒドリル(-SH)に対する効率的かつ特異的な標識を可能にしています。

励起波長域は 400 nm から 770 nm (表 1)で、一般的な蛍光検出機器の主要蛍光波長に対応しています。多くのアプリケーションでAlexa, CyDyes, LI-COR dyes と同等以上の蛍光強度とフォトスタビリティを示し、広いpH域（pH 4-9）での使用に対応します。さらにDyLightの高い水溶性により一般的な蛍光色素の標識で生ずる沈殿も回避、高い標識率(D/P比)も可能にします。

＊　DyLight 547は549に変更、DyLight 647は649に変更されました(2006/07)

表 1. DyLightの蛍光スペクトル

Emission	Fluor	Ex/Em†	See Spectra	e††	Spectrally Similar Dyes
Blue	DyLight 405	400/420		30K	Alexa 405, Cascade Blue
Green	DyLight 488	493/518		70K	Alexa 488, fluorescein, FITC
Yellow	DyLight 549	550/568		150K	Alexa 546, Alexa 555, Cy3,TRITC
Red	DyLight 594	593/618		80K	Alexa 594, Texas Red
Red	DyLight 633	638/658		170K	Alexa 633
Red	DyLight 649	646/674		250K	Alexa 647, Cy5
Near IR	DyLight 680	682/715		140K	Alexa 680, Cy5.5
Near IR	DyLight 750	752/778		210K	Alexa 750
Infrared	DyLight 800	770/794		270K	IRDye* 800

↑最大励起波長(nm)および最大蛍光波長(nm)↑↑モル吸光係数 (M-1 cm-1)

DyLight 488
図1	DyLight 488 標識物（2次抗体、Streptavidin、NeutrAvidin）と Alexa Fluor 488 標識物の相対蛍光強度の比較
DyLight 549 および 649
図2	DyLight 549 標識 Goat Anti-Mouse 抗体と Alexa 555 標識物のマイクロプレートアッセイでの比較
図3	DyLight 649 標識 Streptavidin および NeutrAvidin の Alexa 647 Streptavidin のマイクロプレートアッセイでの比較
DyLight 680 および 800 near-infrared dyes
図4	p53 および cyclophilin B ノックダウンの DyLight 680 および DyLight 800 標識2次抗体によるウエスタンブロットでの近赤外蛍光検出（デュアルカラー）
図5	DyLight 680 および DyLight 800 標識 Streptavidin と Alexa 680 または IRDye 800 標識物のマイクロプレートアッセイでの比較

図 1. dylight conjugates #14 図 1. DyLight 488 標識物（抗体、ストレプトアビジン、ニュートラアビジン）とAlexa Fluor 488 標識物の比較マイクロプレートにrabbit IgG（図1A.）またはビオチン標識ウシ血清アルブミン（図1B.）を図中の濃度でコーティングした。蛍光標識抗体または蛍光標識ビオチン結合性蛋白質をPBSで 0.004 mg/ml に希釈、蛍光強度は Tecan Saffireにより測定した。

図 2. dylight conjugates #15 図 2. マイクロプレートアッセイでのDyLight 549標識抗体, Alexa 555標識抗体の比較図中に表記された濃度でマウスIgGをマイクロプレートにコートした。DyLight 549標識anti-Mousse抗体およびAlexa 555標識anti-Mouse抗体をPBSにより250倍希釈 (1 mg/mlから希釈)、各プレートに100 µlを添加した。蛍光強度はTecan Safire Microplate Reader(Cy3 Dye settings)で測定した。

図 3. dylight conjugates #16 図 3. マイクロプレートアッセイでの DyLight 649標識ストレプトアビジン, DyLight 649標識ニュートラアビジン, Alexa 647標識ストレプトアビジンの比較図中の表記濃度によりビオチン標識BSAをマイクロプレートにコートした。DyLight 649 および Alexa 647 標識物はPBSにより 250倍希釈 (1 mg/ml からの希釈)、100 µlを各プレートに添加した。蛍光強度は Tecan Safire Microplate Reader (Cy5 Dye settings) により測定した。

図4		レーン1: MWマーカーレーン2: mockトランスフェクションレーン3: siRNA陰性コントロールレーン4: siRNAトランスフェクション(p53) レーン5: siRNAトランスフェクション(cyclophilin)
		図 4. DyLight 680 および 800標識二次抗体による p53 および cyclophilin B のノックダウン細胞ライセートのウエスタンブロット近赤外蛍光検出（2カラー） A549細胞ライセートをSDS-PAGEにより分離、PVDF膜に転写した。ブロットは Odyssey Infrared Imaging System(700 および 800 チャンネル)で視覚化した。

図 5. dylight conjugates #17 図 5. マイクロプレートアッセイでの DyLight 680標識ストレプトアビジン, DyLight 800標識ストレプトアビジン, Alexa 680標識ストレプトアビジン, IRDye 800標識ストレプトアビジンとの比較_図中に表記された濃度でビオチン標識BSAをマイクロプレートにコートした。各蛍光標識物をPBSにより10 ug/mlに希釈、各プレートに100 µlを添加した。蛍光強度はOdyssey Infrared Imaging System(700 および 800 チャンネル)で測定した。

DyLight蛍光色素シリーズ：

DyLight蛍光色素は高い蛍光強度に加えて、高いフォトスタビリティ(退色耐久性)、pH安定性、シャープなスペクトルが特徴です。特に蛍光顕微鏡を使用したStructured illuminationなどの最新の画像化技術では、3次元立体再構成像の作成のために免疫蛍光染色された細胞などの試料は数百回ものスキャンを受けるので、高い退色耐久性と蛍光強度が要求されます。
DyLightの高い光安定性は、最新の蛍光イメージング技術でも実証済みです。

dylight conjugates #11 図6. DyLight 633 による HeLa細胞 3D Structured Illuminatin 像 3次元立体再構成は Structured Illumination 収集パラメーターにより得られた70光学切片(～8 um)から行われた。イメージは AxioVision (Zeiss MicroImaging, Inc) による最大投影を行うため圧縮、好ましい投影角度に変更した。210回のスキャンにより収集された70の光学切片でDyLight 633は試料全体に渡って蛍光強度を維持していた。画像編集（コントラスト、明るさ、ガンマ補正）は行っていない。DyLight 633標識物の特異性と強度が判る。赤: anti-tubulin モノクローナル抗体および DyLight 633 標識2次抗体(highly cross-adsorbed) により Alpha tubulin を検出。青: DAPIによる核のカウンター染色。

dylight conjugates #12 図7. DyLight488と633によるHeLa細胞の二重蛍光染色の3次元立体再構成像画像全域に渡る均一な蛍光強度かDyLight488と633の輝度と安定性が示された。Structured illumination により56光学切片（～7um）が収集され、AxioVision Software によりHeLa細胞3次元立体再構成像を作成した。レンダリング前の画像編集（コントラスト、明るさ、ガンマ補正）は今回行っていない。緑: anti-tubulin モノクローナル1次抗体および DyLight 488 標識2次抗体(highly cross-adsorbed) によりAlpha tubulinを検出。赤: anti-Hsp60 ポリクローナル抗体および DyLight 633 標識2次抗体によりHsp60を検出。青: DAPIによる核のカウンター染色。

DyLight蛍光色素の特長：

高い蛍光強度（少量の蛍光標識物で高感度な検出が可能）
シャープな蛍光スペクトル（マルチカラー検出での蛍光チャンネル間のブリードが小さい）
優れたフォトスタビリティ（退色耐性が高くstructured illumination, 4Pi microscopyなどの最も過酷な条件を要求される蛍光イメージングにも対応）
蛍光標識物は pH 4-9 で安定
励起蛍光波長は一般的な蛍光機器のフィルターセットおよびレーザーセッティングに対応

＊　DyLight 547は549に変更、DyLight 647は649に変更されました(2006/07)

アミノ基＆ＳＨ基反応型蛍光色素
Cat.#	製品名	容量	参考価格
46400	DyLight 405 NHS Ester	1 mg	¥40,000
46401	DyLight 405 NHS Ester	5 x 50ug	¥33,000
46402	DyLight 488 NHS Ester	1 mg	¥41,000
46403	DyLight 488 NHS Ester	5 x 50ug	¥33,000
46407	DyLight 549 NHS Ester　←#46200の代替品	1 mg	販売終了
46408	DyLight 549 NHS Ester	5 x 50ug	販売終了
46412	DyLight 594 NHS Ester	1 mg	¥47,000
46413	DyLight 594 NHS Ester	5 x 50ug	¥40,500
46414	DyLight 633 NHS Ester	1 mg	¥46,000
46417	DyLight 633 NHS Ester	5 x 50ug	¥47,000
46415	DyLight 649 NHS Ester　←#46205の代替品	1 mg	販売終了
46416	DyLight 649 NHS Ester	5 x 50ug	販売終了
46418	DyLight 680 NHS-Ester	1 mg	¥50,000
46419	DyLight 680 NHS Ester	5 x 50ug	¥33,000
46420	DyLight 750 NHS Ester	1 mg	販売終了
46423	DyLight 750 NHS Ester	5 x 50ug	販売終了
46421	DyLight 800 NHS-Ester	1 mg	¥50,000
46422	DyLight 800 NHS Ester	5 x 50ug	¥33,000
46600	DyLight 405 Maleimide	1 mg	¥46,000
46602	DyLight 488 Maleimide	1 mg	¥46,000
46607	DyLight 549 Maleimide　←#46300の代替品	1 mg	販売終了
46608	DyLight 594 Maleimide	1 mg	¥46,000
46613	DyLight 633 Maleimide	1 mg	¥46,000
46615	DyLight 649 Maleimide　←#46305の代替品	1 mg	販売終了
46618	DyLight 680 Maleimide	1 mg	¥46,000
46619	DyLight 750 Maleimide	1 mg	販売終了
46621	DyLight 800 Maleimide	1 mg	¥44,000

DyLight蛍光標識済み製品の特徴:

一般的に使用される2次抗体、ストレプトアビジン、ニュートラアビジン
最適化されたモル比 (dye:protein) による優れた蛍光強度
4°C で1年間安定
標識抗体はアフィニティ精製により交叉反応を最小化

＊　DyLight 547は549に変更、DyLight 647は649に変更されました(2006/07)

標識２次抗体
Cat.#	製品名	Pkg.	参考価格	MSDS
35502	Goat Anti-Mouse IgG (H+L), DyLight 488 Conjugated (1mg/ml)	1 ml	¥30,000
35507	Goat Anti-Mouse IgG (H + L), DyLight 549 Conjugated (1mg/ml)　←#31010の代替品	1 ml	販売終了	BID-P199
35510	Goat Anti-Mouse IgG (H+L), DyLight 594 Conjugated (1mg/ml)	1 ml	¥31,000
35515	Goat Anti-Mouse IgG (H + L), DyLight 649 Conjugated (1mg/ml)　←#31015の代替品	1 ml	販売終了	BID-P199
35518	Goat Anti-Mouse IgG (H+L), DyLight 680 Conjugated (1mg/ml)	1 ml	¥30,000	BID-P199
35521	Goat Anti-Mouse IgG (H+L), DyLight 800 Conjugated (1mg/ml)	1 ml	¥30,000
35552	Goat Anti-Rabbit IgG (H+L), DyLight 488 Conjugated (1mg/ml)	1 ml	¥30,000
35557	Goat Anti-Rabbit IgG (H + L), DyLight 549 Conjugated (1mg/ml)　←#31020の代替品	1 ml	販売終了	BID-P199
35560	Goat Anti-Rabbit IgG (H+L), DyLight 594 Conjugated (1mg/ml)	1 ml	¥31,000
35565	Goat Anti-Rabbit IgG (H + L), DyLight 649 Conjugated (1mg/ml)　←#31025の代替品	1 ml	販売終了	BID-P199
35568	Goat Anti-Rabbit IgG (H+L), DyLight 680 Conjugated (1mg/ml)	1 ml	¥30,000
35571	Goat Anti-Rabbit IgG (H+L), DyLight 800 Conjugated (1mg/ml	1 ml	¥30,000	BID-P199

DyLight標識ストレプトアビジン＆ニュートラアビジン
Cat.#	製品名	Pkg.	参考価格	MSDS
21832	Streptavidin, DyLight 488 Conjugated (1 mg/ml)	1 ml	¥38,000	BID-P205
21837	Streptavidin, DyLight 549 Conjugated (1mg/ml) 　　 ←#21424の代替品	1 ml	販売終了	BID-P205
21842	Streptavidin, DyLight 594 Conjugated (1 mg/ml)	1 ml	¥39,000	BID-P205
21845	Streptavidin, DyLight 649 Conjugated (1mg/ml) 　　 ←#21824の代替品	1 ml	販売終了	BID-P205
21848	Streptavidin, DyLight 680 Conjugated	1 ml	¥38,000	BID-P205
21851	Streptavidin, DyLight 800 Conjugated	1 ml	¥38,000	BID-P205
22832	NeutrAvidin, DyLight 488 Conjugated (1 mg/ml)	1 ml	¥42,000	BID-P246
22837	NeutrAvidin, DyLight 549 Conjugated (1mg/ml)	1 ml	販売終了	BID-P246
22842	NeutrAvidin, DyLight 594 Conjugated (1mg/ml)	1 ml	¥35,000	BID-P246
22845	NeutrAvidin, DyLight 649 Conjugated (1mg/ml)	1 ml	販売終了	BID-P246
22848	Neutravidin, DyLight 680 Conjugated	1 ml	¥41,000	BID-P246
22853	Neutravidin, DyLight 800 Conjugated	1 ml	¥41,000	BID-P246

DyLight蛍光標識抗体/Streptavidin

表 1. DyLightの蛍光スペクトル

DyLight蛍光色素シリーズ：

DyLight蛍光色素の特長：

DyLight蛍光標識済み製品の特徴:

Conjugated / Polyclonal