SEA BLOCK, Blocker Casein, Blocker BSA,
Blocker BLOTTO
タンパク質ベースのブロッキングバッファー
ELISAやウェスタンブロットなどの免疫アッセイでは、プレートやメンブランに存在する吸着サイトのブロックが特に重要になります。抗原や捕獲抗体の固相への固定化はプレートやメンブランの表面電荷や疎水的吸着を利用するため、未反応の吸着サイトが残っている場合、検出抗体や標識抗体が非特異的に吸着することになりバックグランドノイズとなります。この非特異的な吸着サイトのブロックにより、バックグランドノイズを軽減することができます。抗原抗体反応を阻害せず、吸着サイトをブロックすればシグナルノイズ(S/N)比が向上し、高感度なアッセイが実現されることになります。 しかし、全てのアッセイシステムで最適に使用できるブロッカーは存在しません。これこそが、サーモフィッシャーサイエンティフィック ピアスブランドが様々なブロッカーを製造している理由です。「どのような標識抗体を使用するか？」 によって、まずブロッキングバッファーの選択が行われます。例えば、アルカリホスファターゼ(AP)標識抗体を使用する場合、TBSで調製されたブロッカーの使用が必要になります。これは、PBSがAPによる酵素反応に影響を与えるためです。またリン酸化抗体を使用した検出でもPBSは使用されません。
ブロッカーとしてミルク、レクチン、フィシュゼラチン、BSA(ウシ血清アルブミン)などが古くから用いられています。ミルクは強いブロッキング作用がありますが、抗原抗体反応の阻害(抗原のマスク)があり、またビオチンやリン酸化タンパクが含まれ、アビジンやリン酸化抗体による検出系では使用しません。ゼラチン(変性コラーゲン)はBSAに比べてブロッキング作用が強くコスト的にも優れた製品が多いですが、1％を超える濃度で使用すると抗原をマスクすることが知れられています。BSAは最も標準的なブロッカーで、安価なため広く使用されています。
交叉反応はブロックに使用されたブロッカーが抗体と反応する現象です。抗体濃度が過剰な場合に交叉反応は生じる傾向がありますが、抗原との間に保存性の高い配列が存在している場合にも生じます。検出するタンパク質(抗原や1次抗体)が哺乳類由来の場合、ブロッカーとして哺乳類以外の動物由来タンパク質を使用することもあります。市販のポリクローナル抗体の殆どは血清カラムなどによりアフィニティ精製され、各種血清タンパクとの交叉反応が最小化されていますが、血清タンパクを含まないブロッカーに代替することで交叉反応が改善されることもあります。 ブロッキングバッファーの選択で最も重要なのはシグナルノイズ（S/N）比です。例えばBSAはバックグランドは低いですが、シグナルが弱く充分な感度が得られないこともあります。免疫アッセイの系を構築しブロッキングバッファーを選択する場合、サーモフィッシャーサイエンティフィック ピアスブランドは以下の順で最適化を行う事を推奨しています。
| Cat# | ブロッキング バッファー |
ELISA | ウェスタン ブロッティング |
ドットブロット | Immuno- histochemistry |
DNA/RNA ハイブリダイゼーション |
参考価格 | MSDS |
| 37538 | StartingBlock™ PBS Blocking Buffer |
☆ | ☆ | ☆ | ☆ | ¥30,000 | ||
| 37542 | StartingBlock™ TBS Blocking Buffer |
☆ | ☆ | ☆ | ☆ | ¥31,000 | ||
| 37539 | StartingBlock™ T20* PBS Blocking Buffer |
☆ | ☆ | ☆ | ☆ | ¥34,000 | ||
| 37543 | StartingBlock™ T20* TBS Blocking Buffer |
☆ | ☆ | ☆ | ☆ | ¥33,000 | ||
| 37515 | SuperBlock® Blocking Buffer in PBS |
☆ | ☆ | ☆ | ☆ | ☆ | ¥27,500 | |
| 37535 | SuperBlock® Blocking Buffer in TBS |
☆ | ☆ | ☆ | ☆ | ☆ | ¥27,500 | |
| 37517 | SuperBlock® Blocking Buffer- Blotting in PBS |
☆ | ☆ | ☆ | ¥27,000 | |||
| 37537 | SuperBlock® Blocking Buffer- Blotting in TBS |
☆ | ☆ | ☆ | ¥25,000 | |||
| 37516 | SuperBlock® T20* PBS Blocking Buffer |
☆ | ☆ | ☆ | ☆ | ☆ | ¥31,000 | |
| 37536 | SuperBlock® T20* TBS Blocking Buffer |
☆ | ☆ | ☆ | ☆ | ☆ | ¥31,000 | |
| 37527 | SEA BLOCK™ Blocking Buffer |
☆ | ☆ | ☆ | ¥30,000 | BID-P200 | ||
| 37520 | Blocker™ BSA in TBS | ☆ | ☆ | ☆ | ☆ | ☆ | ¥23,000 | |
| 37525 | Blocker™ BSA in PBS | ☆ | ☆ | ☆ | ☆ | ☆ | ¥25,000 | |
| 37532 | Blocker™ Casein in PBS |
☆ | ☆ | ☆ | ☆ | ☆ | ¥20,000 | |
| 37528 | Blocker™ Casein in PBS |
☆ | ☆ | ☆ | ☆ | ☆ | ¥21,000 | BID-P212 |
| 37530 | Blocker™ BLOTTO in TBS |
☆ | ☆ | ☆ | ☆ | ☆ | ¥19,000 |
☆:適合
* T20= Tween 20
SEA BLOCK™ Blocking Buffer
サケ血清を使用し、哺乳動物由来のタンパク質を含みません。哺乳動物由来のタンパクが抗原の場合、バックグランドの低減に使用されます。
- スチールヘッドサーモンの血清から調製
- 汎用性の高いブロッカー
- 哺乳動物由来のタンパク質を含まない組成
| Cat.# | 製品名 | 容量 | 参考価格 | MSDS |
| 37527 | SEA BLOCK™ Blocking Buffer | 500 ml | ¥30,000 | BID-P200 |
Blocker™ Casein in PBS and Blocker™ Casein in TBS
Hammarsten Grade のカゼインです。スキムミルクで高いバックグランドが生じる場合に、使用されます
| Cat.# | 製品名 | 容量 | 参考価格 | MSDS |
| 37532 | Blocker™ Casein in TBS 1%(W/V) Casein Hammerstain Grade in TBS, pH7.41 |
1 litter | ¥20,000 | |
| 37528 | Blocker™ Casein in PBS 1% (w/v) Casein Hammersten Grade in PBS, Kathon as preservative, pH 7.4 |
1 litter | ¥21,000 | BID-P212 |
Blocker™ BSA in TBS and Blocker™ BSA in PBS
高品質のウシ血清アルブミン(BSA) の 10% 溶液です。 BSA は全ての免疫アッセイで広く使用される一般的なブロッキング剤です。 Blocker BSA は濃縮された製品であり、使用前に希釈が必要となります。非特異的サイトのブロックには1-3 %で使用されます。
- 汎用性の高いブロッカー
- 10 % 溶液で供給
| Cat.# | 製品名 | 容量 | 参考価格 |
| 37520 | Blocker™ BSA in TBS(10×) 10% BSA in 10mM tris base, 150mM NaCl, 0.05% Sodium Azide, pH7.4 |
125 ml | ¥23,000 |
| 37525 | Blocker™ BSA in PBS(10×) 10% BSA in 0.01M Sodium Phosphate, 150mM NaCl, 0.01% Thimerosal, pH7.4 |
200 ml | ¥25,000 |
Blocker™ BLOTTO in TBS
脱脂粉乳(Nonfat Dry Milk)から調製された ready-to-use なブロッキングバッファーです。
- 希釈等の調整が不要
- 消泡剤(Anti-foam A)、防腐剤(kathon)含有
- Merthilate-Free
| Cat.# | 製品名 | 容量 | 参考価格 |
| 37530 | Blocker™ BLOTTO in TBS 5% (w/v) nonfat powdered milk in TBS, 0.01% Anti-foam A, Kathon as preservative, pH 7.4 |
1 litter | ¥19,000 |
正常血清
タンパク質ベースのブロッキング
バッファー
- SEA BLOCK, Blocker Casein, Blocker BSA, Blocker BLOTTO
- StartingBlock Blocking Buffer
- SuperBlock Blocking Buffer
