SuperSignal ELISA Femto
Maxmum Sensitivity Substrate
ルミノメーター用化学発光基質
SuperSignal® ELISA はホースラディッシュペルオキシダーゼ (HRP) を標識酵素として利用するELISA用の化学発光基質です。二液を等量混合した反応液を調製してHRPを含むウェルに添加することで1分後に最大発光に達します。化学発光基質にはルミノール、過酸化水素の他に発光強度と発光時間を増強するエンハンサーが一般的に加えられます。このエンハンサーの成分により基質の特性は決定されSS ELISA基質ではウェスタンブロッティング用のSS West基質に比べて、下限側での線型性を重視してデザインされ製品化されています。
製品特長
- 優れた検出感度、下限付近での線型性
- 最大発光まで1分間、HTSでの高速自動分析に最適
- 発光持続時間はピコが30分間、フェムトは5分
| #37070 SuperSignal ELISA Pico Substrate | #37075 SuperSignal ELISA Femto Maximum Sensitivity Substrate | |
| Lower Detection Limits | ピコグラム | Fフェムトグラム |
| 主なアプリケーション | 定量的アッセイ | 定量的アッセイ |
| Kinetics | １分間で最大発光に達し、３０分間の発光持続 | １分間で最大発光に達し、５分間の発光持続 |
| その他 | 反応溶液の安定性： ２４時間で活性が１０％の減少 | 反応溶液の安定性： ６時間 Low-endの直線性を高めました |
Fig.1 Kinetic Analysis of 200 pg Biotin-HRP 200pgのビオチン-HRPまたはビオチン-APをそれぞれニュートラアビジンプレートに添加、30分間のインキュベーション（RT）後、TBSバッファーで3回洗浄、100μlの各反応液を添加して１分後に計測時間0.2秒/wellで測定を開始した。
Fig.2 Signal Intensity and Kinetics Comparison
SS ELISA Femto と SS ELISA Pico のIL-2 ELISAにおけるシグナルを様々な発光・発色基質と比較した。
96穴プレートによるIL-2 サンドイッチELISA で168fgのIL-2が検出下限値、回帰直線との相関係数としてR2値1.00が下限付近(＜1600fg)でそれぞれ算出（Fig.1）されています
Fig. 3 : LDL (Lower Detection Limit)
1 ug/ml Rat Anti-Mouse IL-2 Monoclonal IgG (Pharmingen) をDynex Microfluor Plate (白・平底) に吸着(4℃、O/N)させ、SuperBlock (PBS) によりブロッキング （RT, 30min.）した。SuperBlock (PBS) / 0.05% Tween-20 で系列希釈したRecomb. Mouse IL-2を添加してインキュベーション（RT, 2hr.）した。1 ug/ml Biotin- Rat Anti-Mouse IL-2 Monoclonal IgG (Pharmingen) を加えインキュベーション（RT、1hr.）した。1 ug/ml HRP-NA を添加し、インキュベーション（RT, 30in.）後、PBS / Tween-20 で洗浄、SSEF反応液を100ul添加して、攪拌（RT, 1min.）後に測定した。反応液のみのBlank値をバックグランドノイズ、cut-offに2SDを採用してMean Blank + 2SD＝LDLから算出した。下限付近（＜1600fg）の回帰直線への相関係数はR2値1.00であった。
またビオチン標識HRPの系列希釈試料による（液相での）検出限界濃度付近の線型性(Fig.2)についてはR2値は0.99となりました。
Fig.4 : Low-end Linearity PBSで系列希釈したBiotin-HRPを試料として各試料10ulにSSEF反応液を100ul添加後、RTで 1 min.攪拌してRLUを測定した。Dynex microfluor Plate (白・平底)と、MLX Microtiter Plate Luminometerを使用し0.25秒/wellで測定した。回帰直線との相関係数はR2値＝0.99であった。
Fig.5 ：Kinetic Study 等モルのHRP(#31490)とAP(#31391)をそれぞれSSEFとジオキセタン基質と反応させRT、4℃、37℃でのNet RLUを測定して行った。インキュベーション (RT, 1min.) 後、2時間の時間枠で測定は行われた。SSEFの発光は1分間で最大となりRTで20分間、37℃では10分間シグナルを維持した。APの発光はRTで1時間後、37℃で20分間後に最大となった。
| Cat.# | 製品名 | 容量 | 参考価格 | MSDS |
| 37070 | SuperSignal® ELISA Pico Chemiluminescent Substrate * |
100 ｍｌ | ¥43,000 | BID-P020 |
| Luminol/Enhancer Solution 50 ml | ||||
| Stable Peroxide Solution 50 ml | ||||
| 37075 | SuperSignal® ELISA Femto Chemiluminescent Substrate * |
100 ml | ¥44,000 | BID-P020 |
| Luminol/Enhancer Solution 50 ml | ||||
| Stable Peroxide Solution 50 ml | ||||
| 37069 | SuperSignal® ELISA Pico Chemiluminescent Substrate * |
250 ｍｌ | ¥83,000 | BID-P020 |
| Luminol/Enhancer Solution 125 ml | ||||
| Stable Peroxide Solution 125 ml | ||||
| 37074 | SuperSignal® ELISA Femto Chemiluminescent Substrate * |
250 ｍｌ | ¥87,000 | BID-P020 |
| Luminol/Enhancer Solution 125 ml | ||||
| Stable Peroxide Solution 125 ml |
* Patent Pending
* SuperSignal® はサーモフィッシャーサイエンティフィック ピアスブランドの登録商標です
