DyLight Fluorescent Western Blotting Kits

蛍光ウェスタンブロッティングキット

1枚のウェスタンブロット上で2つの異なる目的タンパク質を簡単に蛍光検出するためのキットです。高度に最適化された利便性の高いキットになっており、蛍光ウェスタンブロッティングで必要となる試薬の共存性評価も不要で、時間や労力も節約できます。広範囲（表1）の蛍光イメージングシステムに対応できるように2つのキットから選択可能です。DyLight 549/649 Western Blotting KitではDyLight 549 および DyLight 649で標識された2次抗体が使用されており可視領域での蛍光イメージングに対応、DyLight 680/800 Western Blotting KitではDyLight 680 および DyLight 800標識2次抗体が使用され近赤外域での蛍光イメージング(LI-COR Odyssey* Imaging Systemなど)に対応（表2）しています。

製品特長

  • 1枚のウェスタンブロット上で異なる2つの目的タンパク質を検出
  • キットは最適化されており、2次抗体の希釈率などのプロトコルの最適化も最小限で済ますことが可能、評価に要する時間や労力を削減
  • DyLight蛍光標識2次抗体, ブロッキングバッファー, 洗浄バッファー, デュアル蛍光標識MWマーカー, 低蛍光転写膜
  • 一般的な蛍光検出装置の主要スペクトル波長に対応
表1 DyLightウェスタンブロッティングキットのスペクトル特性
Western Blotting Kit Ex/Em* e† Spectrally Similar Dyes
DyLight 549/649 Western Blotting Kit
DyLight 549 Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) 550/568 150,000 Alexa 546, Alexa 555, Cy3
DyLight 649 Goat Anti-Mouse IgG (H+L) 646/674 250,000 Alexa 647, Cy5
DyLight 680/800 Western Blotting Kit
DyLight 680 Goat Anti-Mouse IgG (H+L) 682/715 140,000 Alexa 680, Cy5.5
DyLight 800 Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) 770/794 270,000 IRDye 800

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図1 DyLight 549/649 Western Blotting Kitによる低バックグランドで高シグナルな2カラー蛍光ウェスタンブロット検出
4-20% Precise Protein Gelsにより電気泳動を行い、低蛍光PVDFメンブランへ転写した。転写後のメンブランは1% BSAによりオーバーナイトでブロッキングして、目的タンパク質は標準プロトコルに従い検出した。メンブランはTyphoon* 9410 (GE Healthcare)でイメージング化した。

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図2 DyLight 680/800 Western Blotting Kitによる低バックグランドで高シグナルな2カラー近赤外蛍光ウェスタンブロット検出
4-20% Precise Protein Gelsによりタンパク質を分離、低蛍光PVDFメンブランに転写した。転写後のメンブランはSEA BLOCKによるオーバーナイトのブロッキング、つづいて目的タンパク質の検出を推奨プロトコールに従い行った。近赤外蛍光検出はLI-COR Odyssey Infrared Imaging Systemにより行った。Tubulin の検出は図中に記載されているHeLa細胞ライセート量に関して、TNFαの検出は図中に記載されている精製TNFα添加量に関して行った。

関連製品リスト

  • DyLight Reactive Dyes & Antibody Conjugates
  • DyLight Antibody Labeling Kits
  • DyLight Near Infrared dyes used with LiCor Odyssey instrumentation
  • Fluorescent MW Markers
  • Low-fluorescence PVDF membrane
製品情報
Cat # 製　品　名 容 量 参考価格 MSDS
22854 DyLight 549/649 Western Blotting Kit
Sufficient reagents for 10 Western blots		 Kit 販売終了 BID-P205
DyLight 549 Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) 50 µl
DyLight 649 Goat Anti-Mouse IgG (H+L) 50 µl
Fluorescent Dual-labeled Protein MW Markers 60 µl
Wash Buffer (30X) 200 ml
Blocker BSA in PBS (10X) 50 ml
Low-Fluorescence PVDF Transfer Membrane 10 each
22855 DyLight 680/800 Western Blotting Kit
Sufficient reagents for 10 Western blots		 Kit 販売終了  
DyLight 680 Goat anti-Mouse IgG (H+L) 150 µl
DyLight 800 Goat anti-Rabbit IgG (H+L) 150 µl
Wash buffer (30X) 200 ml
SEA BLOCK Blocking Buffer 500 ml
Low-Fluorescence PVDF Transfer Membrane 10 each
DyLight Infrared Protein Molecular Weight Markers 30 µl