Pierce Western Blotting Substrate Plus
化学発光 / 化学蛍光ウェスタンブロッティング検出試薬

Pierce Western Blotting Substrate Plusは、化学発光と化学蛍光のどちらでも検出できるウェスタン検出試薬です。通常、ECL Plus試薬と同じ実験条件で同等の検出結果が得られます†。

西洋わさびペルオキダーゼ (HRP; Horseradish Peroxidase)で標識された抗体などのプローブが本製品と反応することで、反応中間体のアクリジウムエステルが形成され、この反応中間体が過酸化物と反応することで、化学発光シグナルおよび化学蛍光シグナルが得られます。

Pierce Western Blotting Substrate Plusは最適化された条件下であれば、ニトロセルロースメンブレンまたはPVDFメンブレン上の抗原をピコグラム低域で検出することができます。シグナルの検出はX線フィルム、CCDイメージング装置、蛍光イメージング装置により可能です。

特長

  • ECL Plus試薬と同じ実験条件で使用可能†
  • 化学発光 (430nm)および化学蛍光 (Ex/Em; 430nm/503nm)††による検出が可能
  • スタンダードな検出試薬に比べて最高20倍高感度‡

†　ECL Plus Western Blotting Detection Reagents （GE Healthcare社）を使用中のお客様は、通常、同じブロッティング条件での検出が可能です（ECLはGE Healthcare社の日本国内における登録商標）。
††　Acridanベースの検出試薬のため、反応中間体として蛍光物質を生じます。
‡　スタンダードな検出試薬としてPierce Western Blotting Substrateと比較した場合。
* Pierce Western Blotting Substrate Plus は、Lumigen社のPS-3 Acridan substrate を用いています。
** 製品名Pierce ECL Plusとして米国で販売している製品を日本向けにパッケージングしている製品です。

icon 本社製品情報ページ ： Thermo Scientific Pierce サイト

パネルA. 他社化学発光・化学蛍光検出試薬との比較

パネルA. 他社化学発光・化学蛍光検出試薬との比較

パネルB. 発光シグナルの継続性と検出バンド

パネルB. 発光シグナルの継続性と検出バンド

パネルC. 異なる検出システムによるシグナル検出

パネルC. 異なる検出システムによるシグナル検出
図. Pierce Western Blotting Substrate Plusによる検出結果

HeLa細胞ライセートをSDSサンプルバッファーで希釈後、煮沸(95℃, 5分間)しました。レーン1 (総タンパク質量10 ug)から1：1段階希釈したサンプルをレーン2-5に10 ul/wellで添加しました。 電気泳動後、ニトロセルロースメンブレン(製品コード 88013)に対してタンパク質を転写、5%ミルクを含むTBST溶液でブロックしました。1 ug/ml Rabbit Anti-Hsp86 (製品コード PA3-013)と6.6 ng/ml Goat Anti-Rabbit HRP (製品コード 31460) との反応後、各条件で検出しました。

パネルAではPierce Western Blotting Substrate Plusまたは他社基質と反応後のメンブレンをThermo Scientific CL-XPosure Film (製品コード 34090)に露光させています。パネルBではPierce Western Blotting Substrate Plus との反応後CL-XPosure Film (製品コード 34090)に露光時間を変えて露光させています。 パネルCではPierce Western Blotting Substrate Plusに反応させたメンブレンから、CL-XPosure Film (5秒間の露光)、Syngene G:Box iChemiXT Imager (CCD; 1 分間の露光)、Typhoon 9410 Variable Mode Imager (Laser-based imager; Ex 457nm, Em 510nm)を用いてシグナルを検出しました。

パネルA)　メンブレンをPierce Western Blotting Substrate PlusとA社 化学発光・化学蛍光検出試薬に5分間反応させた後、CL-XPosure Film (製品コード34090)へ露光させました。

パネルB)　Pierce Western Blotting Substrate Plus検出試薬との反応後経過時間およびX線フィルムの露光時間を変更してバンドを検出しました。検出試薬との反応20時間後も発光が持続することが確認されました。

パネルC)　 HeLa細胞ライセート（総タンパク質量: 10µg）の1：１段階希釈サンプルについて、プローブとして抗Hsp86抗体を、検出試薬としてPierce Western Blotting Substrate Plusを用いてウェスタンブロッティングを行い、X線フィルム、CCDイメージャー、蛍光イメージャーの各検出システムで検出しました。

製品コード 製品 包装 参考価格 MSDS
NCI32132 Pierce Western Blotting Substrate Plus, 100mL
ミニゲル10枚分：1000cm2
キット内容：
　Detection Reagent A, 100mL
　Detection Reagent B, 2.5mL		 Kit ¥33,000 BID-P376