BCA Protein Assay - Reducing Agent Compatible
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BCA Protein Assay - Reducing Agent Compatible

これまでもBCA法は他のタンパク定量法と比べ、界面活性剤・バッファー/塩・溶媒に対して、共存性が高いことは知られていました。新しいBCA Protein Assay - Reducing Agent Compatibleはタンパク質サンプルバッファーで通常使用される濃度での還元剤に対しても共存性があります。

特長

定量域 試料容量 還元剤
共存性		 界面活性剤共存性 検出法
125-2,000
μg/ml		 25 μl < 5 mM DTT 殆どのイオン性/非イオン性界面活性剤の共存 562 nmでの比色定量
< 35 mM 2-ME
< 10 mM TCEP

BCA法は生化学的サンプルのタンパク質濃度を最も正確に測定できる試薬のひとつです。BCA法の特徴は他のタンパク比色定量法に比べて、界面活性剤・バッファー/塩・溶媒などに対する共存性が高いことが知られていましたが、ジチオスレイトール（DTT）や2-メルカプトエタノール（2-ME）などのジスルフィド還元剤の存在下では定量が阻害されることも知られていました。BCA Protein Assay Kit - Reducing Agent Compatibleは従来のBCA法を改良して、通常のタンパク質試料で使用されるバッファーに含まれる濃度での還元剤に対する共存性を備えました。

Figure 1                      Figure 2

図 1.BCA Protein Assay - 標準タイプ　      　　 図 1B.BCA Protein Assay - 還元剤対応タイプ

図 1. BCAアッセイとBCAアッセイ還元剤対応タイプの還元剤に対する共存性の比較1mM以上の還元剤は発色を促進して従来のBCAアッセイを阻害する。新しいBCA還元剤対応タイプでは、還元剤の存在下でも発色の促進は見られない。BSAスタンダード系列希釈溶液は次の濃度で調製し、5 mM DTT を添加した。
Tube 1: 0 μg/ml, Tube 2: 125 μg/ml, Tube 3: 250 μg/ml, Tube 4: 500 μg/ml, Tube 5: 750 μg/ml, Tube 6: 1,000 μg/ml, Tube 7: 1,500 μg/ml, Tube 8: 2,000 μg/ml

Figure 2 A
Figure 2 B
Figure 2 C

図2. BCA Protein Assay - Reducing Agent Compatibleの還元剤共存試料での検量線の線型性評価
各BSA系列希釈サンプルをキットに含まれるCompatibility Reagentにより処理、定量と検量線作製を行った。

各試料において還元剤の存在/非存在の2系列を調製して測定した。

各還元剤は以下の濃度で使用 :
5 mM DTT
35 mM 2-mercaptoethanol
10 mM TCEP

Figure 3

図3.　BCAタンパク定量アッセイ　還元剤対応タイプ プロトコール
＊U.S Patent Number 4,839,295
＊ImmunoPureはサーモフィッシャーサイエンティフィック　ピアスブランドの登録商標です

製品情報
Cat.# 製品名 容 量 参考価格 MSDS
23250 BCA Protein Assay Reagent Kit
-Reducing Agent Compatible-		 Kit ¥41,000 BID-P101
BID-P154
#23221 試薬 A
#23224 試薬 B
Compatibility Reagent
Reconstutution Buffer
#23209 アルブミンタンダ-ド 2 mg/ml　（アンプル）		 250 ml
25 ml
10 x 20 mg
15 ml
10×1 ml