Human In Vitro Glycoprotein Expression Kit
ヒト型糖鎖修飾システムをもつヒト細胞由来無細胞タンパク質合成キット
Thermo Scientific Pierce Human In Vitro Glycoprotein Expression Kitsは、目的タンパク質を試験管内で簡便に合成するためのヒト細胞由来無細胞タンパク質合成キットです。ヒト細胞の翻訳システムを模倣しているため、哺乳類由来のさまざまなタンパク質が合成できるだけでなく、ヒト型の翻訳後修飾によりN結合型グリコシル化を受けたタンパク質の調製が可能です。糖タンパク質合成を行うために、イヌ膵臓由来のマイクロソーム添加が必要なウサギ網状赤血球由来の無細胞系に比べて合成量が高く、昆虫細胞由来の無細胞系に比べて均一な糖鎖修飾が可能です。
特長
- ヒト型糖鎖修飾システムによる糖タンパク質が合成可能
- 単一バンドの糖タンパク質が合成可能
- マイクロソーム添加が必要なウサギ網状赤血球系に比べて高収量の糖タンパク質合成
アプリケーション
- 非天然アミノ酸標識したタンパク質の調製
- 細胞毒性のあるタンパク質の調製
- タンパク質機能解析
- 変異タンパク質の調製
図1 Pierce Human In Vitro Glycoprotein Expression Systemと昆虫無細胞系を用いて合成したヒト絨毛性ゴナドトロピンホルモンβサブユニット（hCGβ）の糖鎖修飾確認
hCGβ遺伝子を各製品指定のベクターにクローニングした後、T7 Megascript Kits (Life Technologies社)を用いてmRNAを調製し、各製品プロトコルにしたがって無細胞タンパク質合成を行いました。合成後の反応液は、エンドグリコシダーゼH（Endo H）処理を行って糖鎖の加水分解を行いました。昆虫無細胞系では、mRNA量が1 µgの場合hCGβの合成が確認されず、12 µgのmRNAを用いて合成した場合、鎖長の異なる複数の糖鎖修飾を受けた不均一なhCGβのバンドが確認されました。一方、Human In Vitro Glycoprotein Expression Systemでは糖鎖修飾を受けた単一バンドが確認されました。
キットに共通のコンポーネント:
- Lysate for Glycoprotein Expression
- Accessory Proteins
- Energy Mix
- Salt Solution
- Amino Acid Mix – Leu
- Amino Acid Mix – Met
- Amino Acid Mix – Cys
- RNase Inhibitor
- Positive Control
- Nuclease-free Water
| Cat# | 製 品 名 | 容 量 | マニュアル | 価 格 | MSDS |
| 88851 | Human In Vitro Glycoprotein Expression Kit - DNA For use with DNA templates Includes general kit contents listed above and: Transcription Buffer NTP Mix T7 RNA Polymerase |
50 反応 |  |
販売終了 | BID-P271 |
| 88852 | Human In Vitro Glycoprotein Expression Kit - DNA For use with DNA templates Includes general kit contents listed above and: Transcription Buffer NTP Mix T7 RNA Polymerase |
10 反応 | |
販売終了 | BID-P271 |
| 88853 | Human In Vitro Glycoprotein Expression Kit - mRNA For use with mRNA templates Includes general kit contents listed above |
50 反応 | |
販売終了 | BID-P271 |
| 88854 | Human In Vitro Glycoprotein Expression Kit - mRNA For use with mRNA templates Includes general kit contents listed above |
10 反応 | |
販売終了 | BID-P271 |
