RNAおよびsiRNAの濃度計算 FAQ

RNAの定量について、Beer'sの法則より次式の関係があります。
　吸光度（260 nm）　＝　ε x モル濃度（M） x 光路長（cm）
（ε：　モル吸光係数は製品添付のProduct Transfer Formに記載しています）
この式からRNA溶液の濃度は次のように求められます。
　　モル濃度（M）　＝　吸光度（260 nm）/（ε x 光路長（cm））
10 mmセルで吸光度測定する場合には光路長は１に、2 mmセルで測定する場合には0.2になります。

siRNA製品はnmol量の乾燥ペレットとして出荷されます。
ストック溶液の濃度は次式の関係があるので、
ストック溶液濃度（µmol/L）　＝　siRNAの量（nmol）／バッファー液量（µL）
この式から未知の値を求めます。単位は消し合うように計算します。

計算例： 20 nmolのsiRNAから50 µMのストック溶液を調製する場合のバッファー液量
a) 基本式は：　(20 nmol)/ X µL = 50 µmol/L
b) 未知の値について変形すると：　X µL = (20 nmol)(1 L/50 umol)
c) 単位を変換して：　X µL = (20 nmol)(1 L/50 umol)(1 µmol/1000 nmol)(10⁶ µL/1 L)
d) 目的のバッファー液量は：　X (uL) = 400 (uL)
したがって、20 nmol のsiRNAを400 µLの1X RNase-free bufferで溶解すると50µMの溶液が調製できます。

初めにsiRNAのnmol数を求めます。
a) 式：　Y nmol = (6 µL)(10 µmol/L)
b) 単位の変換：　Y nmol = (6 µL)(10 µmol/L)(1 L/10⁶ µL)(1000 nmol/µmol)
c) nmol数：　Y nmol = 0.06 nmol
したがって、0.06 nmolのsiRNAがストック溶液6 µLに含まれます。

次に、nmolをµgに変換します。siRNAの分子量を使います。対象とするsiRNAの分子量が不明なときは、平均分子量13300 g/molを使ってもいいでしょう。
a) 式：　Z µg = (0.06 nmol)(13,300 g/mol)
b) 単位の変換：　Z µg = (0.06 nmol)(13,300 g/mol)(mol/10⁹ nmol)(10⁶ µg/g)
c) µg：　Z µg = 0.798 µg, or 0.8 µg
したがって、10 µMのsiRNAストック溶液6 µLには0.8 µgのsiRNAが含まれています。

siRNAの製品仕様書に記載の分子量を使用して変換してください。
分子量が分からない場合には、siRNAの平均分子量（13,300 g/mol）を使用することができます。
例えば、5 nmolのsiRNAについては、以下のような変換になります。
a) 式：　X nmol = (5 nmol)(13,300 g/mol)
b) 単位の変換：　X nmol = (6 µL)(10 µmol/L)(1 L/10⁶ µL)(1000 nmol/µmol)
c) nmol数：　X nmol = 66.5 µg
したがって、5 nmolのsiRNAは66.5 µgとなります。