siRNA 実験デザイン FAQ

平均分子量は13,300 g/molです。したがって、1 nmolのsiRNAは13.3 μgのsiRNA、1 mgの siRNA は75 nmolとなります。

はじめにノックダウン効率を確認する実験として、終濃度100 nMのsiRNAをお試しください。ノックダウン効率が十分であることを確認した後、ノックダウン効果を維持しつつsiRNAの濃度を徐々に下げ、使用するsiRNAの量を少なくすることが可能です。1 nmolのsiRNAがあれば、終濃度100 nMのsiRNAトランスフェクション溶液を10 mＬ調製することができます。これは96あるいは24ウェルのプレートを１枚準備するのに十分な量です。

蛍光標識されたsiRNAはトランスフェクション条件の至適化の際に用いられています。蛍光標識siRNAの細胞への取り込みは、フローサイトメトリーや共焦点蛍光顕微鏡により容易に検出できます。お使いの検出装置の操作法にしたがって、蛍光標識された細胞を検出してください。ヌクレアーゼ耐性を高める特別な修飾をもたないsiRNAでは、siRNAの機能と蛍光強度が相関しない可能性がある点に注意してください。