Dharmaconテクノロジー
（miRIDIAN microRNA Mimic およびHairpin Inhibitorの特長と有用性）

サーモフィッシャーサイエンティフィックでは、microRNA関連の研究において有用な独自の製品を開発提供しています。microRNA の研究においては、microRNA の機能を増加もしくは抑制した上で、その表現型への影響を評価することが重要となります。今号では、microRNAのMimic(模倣体)であるmiRIDIAN microRNA Mimic と、インヒビターであるmiRIDIAN microRNA Hairpin Inhibitorの特長と有用性を紹介します。
（執筆担当 サーモフィッシャーサイエンティフィック（株）バイオサイエンス事業本部 広瀬）

miRIDIAN microRNA Mimicの特長

miRIDIAN microRNA Mimic は、内在性microRNA の機能を効果的に模倣し機能増加するようにデザインされた、独自の化学修飾をもつ二本鎖のRNA です。 icon miRBase Sequence Database に登録されているヒト・マウス・ラットのmicroRNA に対応しています。

  • 内在性成熟microRNA の機能を効果的に模倣
  • microRNA の機能獲得（gain-of-function）による特定のmicroRNA の機能解析に有用
  • センス鎖がRISC に取り込まれるのを防ぎ、アンチセンス鎖がRISC に取り込まれやすくする独自の化学修飾
  • Native-based mimic よりも優れたパフォーマンス
  • 低濃度で長時間効果が持続

miRIDIAN microRNA Hairpin Inhibitorの特長

miRIDIAN microRNA Hairpin Inhibitor は、内在性microRNA の機能を阻害するようにデザインされた、化学修飾とヘアピン構造をもつ一本鎖のRNA です（図1）。 icon miRBase Sequence Database に登録されているヒト、マウス、ラットのmicroRNA に対応しています。この新規microRNAインヒビターのデザインは、サーモフィッシャーサイエンティフィックの研究開発グループにより報告された知見をベースとしています icon (Double-stranded regions are essential design components of potent inhibitors of RISC function. RNA, May 2007. 13: 723-730.)。

  • 先進のデザインにより内在性成熟microRNA の機能を効果的に抑制
  • microRNA の機能抑制（loss-of-function）による特定のmicroRNA の機能解析に有用
  • 独自の化学修飾と新規な二次構造（ヘアピン構造）モチーフを採用
  • 低濃度で長時間効果があるため複数のmicroRNA を低毒性で同時に阻害可能

Fig01

図1 miRIDIAN microRNA Hairpin Inhibitorの構造模式図

miRIDIAN microRNA Mimic およびHairpin Inhibitorの特長と有用性

miRIDIAN microRNA Mimic およびHairpin Inhibitorの有用性を、研究の進んでいるmiR-122を対象として評価しました(図2)。miR-122に対応するmiRIDIAN microRNA MimicをmiR-122 reporter plasmidとコトランスフェクションしたところ、ネガティブコントロール区と比較してRenilla luciferaseの発現が1/3以下に低下しました。一方、miR-122に対応するmiRIDIAN microRNA Hairpin InhibitorをmiR-122 reporter plasmidとコトランスフェクションしたところ、ネガティブコントロール区と比較してRenilla luciferaseの発現が8倍以上に増加しました。 以上の結果から、miRIDIAN microRNA Mimic およびHairpin Inhibitorを用いることにより、microRNA の機能を効率よく増加もしくは抑制できることが示されました。

Fig02

図2 Huh-7細胞におけるmiRIDIAN microRNA Mimic およびHairpin Inhibitorの機能評価

miR-122のターゲット配列を挿入したpsiCHECK-2ベクター（miR-122 reporter plasmid）を単独あるいは各種miRIDIAN製品とともにDharmaFECT Duoを用いてHuh-7細胞にトランスフェクションしました。48時間後にデュアルルシフェラーゼレポーターシステムを用いてmiRIDIAN製品の機能を評価しました。